Антигенный тест. Уреазный дыхательный тест или хелик тест. Иммунологические техники исследования

Диагностический анализ на выявление в организме микроорганизма Хеликобактер Пилори посредством проведения ПЦР распространен во всем мире. Для проведения анализа достаточно сдать кал, никаких инвазивных процедур не требуется (как, например, в случае с ФГДС методом диагностики).

Самыми серьезными минусами этой процедуры считают сравнительно низкую точность и неудобство в сдаче материала для анализа.

1.1 Насколько точен тест?

Современные исследования указывают на достаточно высокую точность ПЦР анализа кала на наличие бактерии Helicobacter Pylori. Чувствительность теста колеблется в диапазоне между 64-94%.

Некоторых пациентов может смутить столь большой разброс в чувствительности теста. Однако стоит понимать, что в медицине нет идеально точных диагностических методик, а показатель в 64-94% является более чем удовлетворительным. Для более точного диагноза следует сочетать этот метод с другими способами выявления Хеликобактер (анализ крови, дыхательный тест, и так далее).

1.2 Диагностика и лечение Хеликобактер (видео)

1.3 Преимущества и недостатки метода

К преимуществам ПЦР анализа кала относят:

1. Немалую чувствительность (точность) метода.
2. Не требуется инвазии (проникновения, как при ФГДС) для выполнения процедуры, а сама процедура технически очень проста.
3. Абсолютная безопасность для здоровья пациента.
4. Возможность обнаружения различных штаммов и форм бактерии Helicobacter Pylori.
5. Возможность с этой же пробы сразу провести анализы и на другие заболевания.

К недостаткам ПЦР анализа кала относят:

• невозможность определения чувствительности к антибиотикам;
• невозможность отличить прошедшую инвазию Хеликобактер Пилори от существующей;
• сам метод доступен не в каждом медицинском центре.

2 Общее описание и виды метода

ПЦР тест на наличие в ЖКТ микроорганизма Helicobacter Pylori основан на молекулярно-генетическом анализе многократного умножения образца бактерии Хеликобактер Пилори. Стоит отметить, что для этого метода диагностики берется не кровь, а кал.

ПЦР анализ проводится с помощью двух способов:

• культурального;
• иммунологического.

При культуральном ПЦР анализе биологический материал кладут в чашку Петри, в которой заблаговременно создаются благоприятные условия для размножения Хеликобактер Пилори.

Через 5-7 дней проводится осмотр чаши и если в ней за этот срок развилась колония микроорганизма Helicobacter Pylori, то результат является положительным. К сожалению, на точность этого метода могут повлиять выпитые накануне антибиотики, о чем пациенты должны быть осведомлены.

При иммунологическом виде ПЦР анализа маркированные антитела помещают в анализируемый образец. В итоге, при наличии бактерии Хеликобактер Пилори, можно увидеть образование специфических комплексов антиген-антитело, что говорит о положительном результате анализа.

2.1 Подготовка и сдача анализа

За трое суток до проведения теста следует отменить прием антибиотиков, слабительных средств, ректальных свеч и замедляющих перистальтику лекарств. При невозможности отмены препаратов из списка (по жизненным показаниям) требуется консультация с врачом.

Сбор кала для анализа осуществляется исключительно в выданную в больнице или лично приобретенную специальную медицинскую тару (ее можно купить в любой аптеке).

Доставлять исследуемый биоматериал нужно как можно быстрее. При невозможности быстрой транспортировки следует хранить тару с биоматериалом при температуре в +3-9 градусов, но не более суток с момента сбора.

Важно: если анализ проводится повторно, после проведения антибактериальной терапии, тест нужно проводить не ранее четырех недель после окончания лечения. В иных случаях он будет неэффективен и покажет ложный результат.

2.2 Расшифровка и нормы

Расшифровка результатов для бактериологического метода ПЦР исследования:

• количество микроорганизмов 0 - микроорганизм Хеликобактер Пилори не выделен (норма);
• количество больше 0 - наличие хелибактериоза (подтверждается даже в том случае, если больной не имеет симптомы болезни), требуется лечение;
• S - чувствительность к указанному в результате антибиотику;
• R - резистентность (полная устойчивость) к указанному в результате антибиотику;
• I - умеренная чувствительность к указанному в результате антибиотику.

Расшифровка результатов для иммунологического метода ПЦР исследования:

• отрицательный результат - микроорганизм Helicobacter Pylori не выделен;
• положительный результат - наличие хеликобактериоза, требуется лечение.

Рубрики:

Антиген лямблий в кале, что это такое, как сдавать анализ, зачем он нужен? Вопросы интересуют людей, которых просят сдать кал на исследование в очередной раз, после неудачных попыток копрологии каловых масс.

Существуют такие методы диагностики лямблиоза:

Определение антигена giardia lamblia в кале

В каждой иммунной клетке присутствует молекула, притягивающая антиген чужеродной клетки. Она передает информацию иммунной системе. Если она не может идентифицировать чужеродную клетку, направляет усилия для ее уничтожения. Выявить этот сложный процесс в организме можно с помощью анализа за антитела, антигены.

Процедура состоит из нескольких составляющих:

• ферментативной реакции;
• иммунного ответа.

Изначально в каловые массы лаборант добавляет АТ лямблий. Их задача – притянуть антиген
простейших. Через время вводят реагенты, с помощью которых удаляют клетки, что не вступили в реакцию. Промывают несвязанные ферменты. Добавляют специальный стоп-раствор, замедляющий реакцию. Он же меняет цвет исследуемого материала, по нему проводят диагностику. При положительной реакции на антиген, исследуемый материал окрашивается в темный цвет.

Достоверность анализа

Невозможно поставить правильный диагноз, если в кале присутствует хотя бы малое количество кишечной палочки. Отрицательный результат исследования при явных симптомах болезни говорит о том, что организм еще не успел отреагировать на присутствие чужеродных клеток. Рекомендуется сдать анализ повторно. Следовательно, исследование каловых масс на антигены лямблий нельзя считать основательным. Проводится параллельно с анализом крови на антитела, кала на наличие кист.

Вещество проникает в слизистые, разрушает клетки, а оболочки органов желудочно-кишечного тракта покрываются язвами, развивается воспаление.

1. полимерная цепная реакция (ПЦР);
2. иммунологический анализ;
3. культуральный анализ.

Любой вид анализа кала на хеликобактериоз нетравматичный, чем он отличается от анализа крови (когда определяют антиген), и гастродуоденоскопии.

Метод заключается в многократном умножении образца патогенного микроорганизма. Чтобы провести реакции необходимо применить своего рода каркас, который состоит из праймеров, которые получают путем искусственного синтеза ДНК, аналогичных нуклеиновой кислоте хеликобактер пилори.

• кислотность среды;
• значения температуры.

Культуральный, иммунологический анализ

Под культуральным анализом следует понимать бактериологический посев. Кал помещают в среду, благоприятную для взращивания колонии хеликобактера. Спустя определенный срок культуру необходимо изучить под микроскопом, применив различные методики, так к примеру, проводится и .

Данный метод позволяет не только выявить антиген, но также произвести тестирование на степень чувствительности к антибиотикам. Это поможет сократить затраты и сроки лечения, повысив тем самым эффективность терапии.

Однако в отдельных случаях тест на чувствительность in vitro может не совпадать с результатом in vivo, по этой причине антибиотики, подобранные в результате лабораторного метода, могут быть недостаточно эффективными.

Показаниями к ПЦР кала станут:

1. эрозия, язва желудка, двенадцатиперстной кишки;
2. полипы, новообразования в желудке;
3. атрофия слизистых оболочек желудка;
4. контроль эффективности антибиотиков;
5. заброс содержимого желудка в пищевод;
6. наследственность.

Его назначают сдать для оценки целесообразности специфического лечения антибиотиками.

Показанием к культуральному анализу станет необходимость определения степени чувствительности к медикаментам при недостаточной эффективности эмпирической терапии. Так как данный анализ достаточно сложный и долгосрочный, его не всегда применяют для диагностики хеликобактер пилори.

Показаниями к иммунологическим методам исследования кала станут:

• признаки патологий кишечника, желудка (изжога, отрыжка, боль, понос, запор, дискомфорт);
• генетическая предрасположенность;
• тромбоцитопения неустановленной этиологии;
• железодефицитная анемия;
• случаи инфицирования ближайшего окружения.

Иммунологические исследования и ПЦР необходимо назначать для скрининга, так как простота метода и доступная стоимость дает возможность проводить его широким массам населения с целью выявить наличие органических, опухолевых поражений. К сожалению, в нашей стране такой скрининг не получил популярности.

Если до инструментальных методов провести иммунологический анализ, при соответствующих симптомах он позволит предположить присутствие хеликобактер пилори. Уже по результатам анализов доктор примет решение о необходимости дополнительного исследования или лечения.

Специфическое лечение антибиотиками показано только при тенденции к стремительному прогрессированию:

1. поражений (язвы, эрозии);
2. атрофического процесса.

Под чувствительностью теста следует понимать способность получить истинный положительный результат. Чем ниже чувствительность, тем выше количество ложноположительных результатов (когда антиген обнаруживают у здорового человека).

Специфичность теста – это показатель, который зависит от количества ложных отрицательных результатов (когда антиген у больного не выявлен). Исследования, проведенные ПЦР методом, отличаются чувствительностью от 64 до 94%, и 100% специфичностью.

Как правильно сдавать кал? Забор материала не предусматривает использование местных анестетиков, которые часто провоцируют развитие аллергических реакций, в отличие от:

• забора крови;
• процедуры гастродуоденоскопии.

Также сдача анализов не причиняет дискомфортных ощущений, боли, анализ безопасен с точки зрения вероятности заражения «грязными» медицинскими инструментами.

Исследование исключает необходимость прикладывать определенные усилия, например, как дыхательный метод. Процедура доступна даже для пациентов детского возраста.

Недостатки анализа методом ПЦР:

Главный недостаток такого метода – продолжение его достоинства: высокая чувствительность становится причиной получения ложноположительного результата, если произошла контаминация анализируемых материалов.

Как сдавать анализ (подготовка)

Достоверность и точность результата любого анализа будет зависеть от четкого выполнения определенных условий на каждом этапе.

Как правильно сдавать анализы на хеликобактер пилори? В первую очередь важна подготовка. Ее начинают с отмены антибиотиков, ректальных свечей, слабительных препаратов, которые замедляют перистальтику кишечника. Поэтому перед тем, как сдать анализ, необходимо предупредить своего доктора о применяемых лекарственных препаратах.

Забор кала нужно производить в специальную посуду, пробу кала берут из трех разных точек. Собранный материал следует доставить в лабораторию как можно раньше, если нет такой возможности, пробу хранят не более 24 часов при температуре от 2 до 8 градусов.

Когда анализ выполняют для оценки эффективности терапии, кал собирают не раньше, чем спустя 1 месяц после прекращения лечения.

Следует принимать во внимание, что замедление движения каловых масс, а также частые запоры, могут становиться причиной разрушения хеликобактер пилори в фекалиях. Этот факт является причиной получения ложноотрицательных результатов. В целях повышения достоверности результата доктор может рекомендовать Лактулозу – легкое слабительное средство. Видео в этой статье наглядно покажет, как проводится диагностика хеликобактер пилори.

Микроорганизмы под названием «Хеликобактер пилори» провоцируют развитие многих поражений пищеварительного тракта. В процессе размножения они губительно действуют на слизистую желудка, что ведет к воспалительным реакциям. В данной статье рассказывается, как сдавать анализ на эту инфекцию, а также указываются особенности расшифровки полученных данных.

Показания к назначению анализов на выявление Helicobacter pylori

Такое лабораторное обследование назначают при появлении у пациентов жалоб на:

• болевые ощущения в желудке, особенно после еды;
• частую изжогу;
• отрыжку;
• затрудненное глотание;
• тошноту или рвоту;
• любые нарушения стула;
• потерю веса и ухудшение аппетита;
• появление крови в кале или при рвоте;
• непереносимость мясной пищи;
• тяжесть в желудке.

Возбудители хеликобактерной инфекции могут передаваться через слюну, поэтому заразиться можно через посуду или поцелуи. При обнаружении такой инфекции у одного из членов семьи обследование стоит пройти всем лицам, которые проживают вместе с ним.

Хеликобактер пилори: анализ крови, норма

Для выявления указанной бактерии используют иммуноферментный анализ. Его суть заключается в определении концентрации антител в плазме к Хеликобактер. При попадании возбудителя во внутреннюю среду организма происходят сложные иммунные процессы, которые направлены на удаление генетически чужеродного белкового соединения, которым и является Helicobacter.

В случаях, когда инфекционный агент уже попал в организм, но иммунная система еще не успела на него отреагировать, при лабораторном исследовании можно получить ложнонегативные результаты. Также при элиминации бактерии еще некоторое время могут выявляться антитела к ней (псевдопозитивная реакция). Учитывая такую закономерность, проводят фракционное определение уровня иммуноглобулинов:

• Ig M – являются самыми большими, однако составляют только 10% от общего числа иммуноглобулинов. Эти антитела можно обнаружить раньше, чем Ig G.
• Ig A – их выявляют не только в крови, но и в соке желудка или слюне, что говорит о значительной активности патологического процесса.
• Ig G – класс иммуноглобулинов, который составляет 75% от всех типов.

Эти белковые вещества появляются через месяц после попадания инфекции в желудок. Концентрация igg прямо пропорциональна активности хеликобактерной инфекции. Кроме этого, слабоположительные результаты встречаются еще через месяц после проведения лечения и полного излечения от хеликобактериоза.



Норма анализа – это отсутствие хеликобактерной инфекции в организме. При повышении уровня всех иммуноглобулинов говорят об активном инфекционном процессе. В данном случае при оценке результатов во внимание принимают суммарные антитела.

Как подготовиться к сдаче вышеуказанных анализов?

Достоверность лабораторных тестов зависит от правильной подготовки. Накануне исследования рекомендуется избегать физической или эмоциональной нагрузки, запрещается употреблять алкоголь или кушать жирные блюда. Забор материала проводят утром натощак (последний прием пищи должен происходить за 8 часов до обследования).

За две недели до сдачи крови следует прекратить прием медикаментов, особенно это касается антибиотиков. При невозможности отменить фармакологическую терапию, это обязательно следует учитывать, когда проводится расшифровка результатов. Также следует обратить внимание на наличие недавно перенесенных болезней в анамнезе. За несколько часов до забора крови запрещено курить. Материал для исследования забирают из вены. Кровь набирают в специальную пробирку, где она сворачивается, а плазма отделяется (именно в ней выявляют Ig).

Анализ крови на Хеликобактер пилори в большинстве случаев сдают без осложнений. Если после забора материала пациент чувствует слабость или головокружение, можно выпить сладкого чая. Чтобы в месте венепункции не образовалась гематома, после забора крови руку следует подержать согнутой в локтевом суставе. При необходимости на месте прокола можно поставить сухое тепло.

Анализ кала на Хеликобактер

Данный анализ является самым удобным, поэтому его часто проводят среди детей, стариков или среди лиц с серьезными заболеваниями, поскольку обследование исключает любое травмирование. Его суть заключается в выявлении фрагментов ДНК возбудителя. Для проведения исследования применяют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Найденный фрагмент микроорганизма клонируют до необходимого количества. Такое исследование является новейшей методикой и применяется в диагностике многих болезней. Среди его преимуществ можно указать:

• универсальность;
• специфичность;
• высокую чувствительность (возбудителя обнаруживают даже при условии, что в биоматериале всего несколько патологических клеток, поэтому такой метод исследования считается более точным);
• скорость выполнения;
• возможность обнаружить возбудителя как при остром, так и при хроническом течении инфекционного процесса.

При сдаче материала на антиген Helicobacter pylori после лечения следует учитывать, что возбудитель еще долгое время выявляется методом ПЦР, поскольку из организма выводятся частички погибших бактерий.

Для подготовки к сдаче кала рекомендуют ограничить количество продуктов, которые содержат много пищевых волокон или окрашивающих веществ. Также не следует принимать лекарственных средств, которые усиливают перистальтику. Запрещено стимулировать работу кишечника с помощью клизм или касторового масла, поскольку полученный таким образом кал не подходит для лабораторной диагностики. Кроме этого, исследуемый биоматериал не должен содержать никаких примесей, поэтому в течение нескольких дней до сдачи анализа нельзя использовать препараты в форме анальных свечей.

В цифрах результат данного анализа не подают, а только говорят о положительном или отрицательном результате тестирования. Если получен положительный результат, то это указывает на имеющуюся или перенесенную инфекцию. При отрицательном результате можно сделать вывод, что в обследуемом образце нет генетического материала возбудителя.

Указанная бактерия обладает способностью образовывать фермент – уреазу. Она защищает микроорганизм от соляной кислоты и расщепляет мочевину. В процессе этого образуется углекислый газ, который выделяется при акте дыхания и может быть обнаружен при уреазном анализе. Указанный тест проводят с использованием мочевины, которую метят изотопами. Сначала пациент дышит через трубку. Забирают 2 пробы воздуха. После этого больной выпивает специальный раствор и сдает следующие 4 пробы.

Также используют уреазный тест 13С. Его проводят с применением мочевины, которую метят нерадиоактивным (стабильным) 13С. Этот тест также информативный и удобный, а главное – относительно безопасный, так как не требует применения радиоактивных соединений. Первую пробу воздуха забирают на голодный желудок, а следующую – спустя 30 минут после приема специального раствора.

Кроме этого, существует так называемый хелик-тест. Он напоминает уреазный тест, но вместо изотопов углерода в нем применяют раствор карбамида, который является безопасным для детей и беременных. Однако считается, что хелик-тест является недостаточно точным, поэтому его используют ограниченно.

Чтобы не было значительных погрешностей, к дыхательному тесту следует подготовиться. Накануне рекомендуется только легкий ужин. Завтракать категорически запрещено. Пить можно не позднее, чем за 1 час до обследования. За двое суток следует исключить из рациона продукты, которые провоцируют газообразование (особенно капусту, яблоки и черный хлеб). Нельзя за несколько дней до анализа употреблять алкоголь. За 2 недели следует прекратить прием антацидов и лекарств, которые влияют на желудочную секрецию. На результат может повлиять прием антибиотиков.

Иногда при проведении гастроскопии также могут провести исследование на наличие Хеликобактер. Для этого при осмотре слизистой желудка забирают частичку ткани (биоптата) с помощью эндоскопа и рассматривают ее под микроскопом, а также проводят хелик-тест. Если обнаруживают высокую уреазную активность биоптата (появление синего цвета), то делают вывод о присутствии Helicobacter .

Если тест на Хеликобактер положительный, то это значит, что у пациента есть высокий риск развития гастритов, язвы и дуоденита. Указанная инфекция может способствовать формированию лимфомы желудка или его ракового поражения, поэтому своевременная терапия является чрезвычайно важной.

Хеликобактер довольно устойчив к антибиотикотерапии, а длительный прием лекарств или неправильное дозирование приводят к дисбактериозу кишечника. Часто в план лечения добавляют лекарственные средства, которые регулируют желудочную кислотность.

После выявления хеликобактерной инфекции пациентам важно не только пройти фармакологическое лечение, но и правильно питаться. Показан дробный прием пищи, чтобы не перегружать желудок. Из меню следует исключить острые и жареные блюда, копченые и слишком соленые продукты, маринады и специи. После проведенного лечения врач назначает повторную сдачу анализов для определения эффективности терапии или для коррекции фармакологической терапии.